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细胞计数仪怎么操作
1、细胞计数仪怎么操作
、将计数板及盖玻片擦拭干净,并将盖玻片盖在计数板上。
、轻轻吹打细胞悬液,使细胞均匀分布;吸出少许细胞悬液滴在细胞入口,使细胞悬液充满盖玻片和计数板之间,静置1-2min,使细胞沉降;注意盖玻片下不要有气泡,也避免细胞悬液进入旁边的槽中。
、在显微镜下对A/B/C/D四个大格内的细胞进行计数,压在大格四周边线上的细胞只计数压在2条边线上的细胞(如右侧和下方);若镜下有2个细胞组成的细胞团,则应按单个细胞计算;若细胞团数量较多,占细胞总量的10%左右,则说明细胞分散不好会导致计算不准确,需要重新制备细胞悬液。
、按公式计数细胞数量:细胞数/mL=四个大格内细胞总数×104/4?(每一个大格的体积为长1mm×宽1mm×高=,1mL=1000mm3,因此计算时需×104)。
2、细胞计数仪的原理
、电阻抗检测原理血细胞是相对不良导体,当血细胞悬浮电解质中,将小孔管插入细胞悬液,使其管内充满稀释液,当一个细胞通过小孔时,瞬间引起电压变化出现一个脉冲信号,细胞体积越大,引起脉冲越大,产生脉冲振幅越高。
、流式细胞术加光学检测原理利用流式细胞术使单个细胞随着流体动力聚集的鞘流液在通过激光照射的检测区时,使光束发生折射、衍射和散射,散射光光检测器接受后产生脉冲,脉冲大小与被照细胞的大小成正比,脉冲的数量代表了被照细胞的数量。
3、白细胞分类原理
白细胞三分类原理:根据电阻抗法原理,不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显差异,仪器根据脉冲的大小将白细胞进行分群。标本中加入溶血剂,将红细胞溶解,仪器将从白细胞计数池中测量得到的大于35fl电子脉冲的数量作为白细胞计数。同时根据脉冲的大小将血内白细胞分为三群:小细胞群(35～90fl,主要为淋巴细胞)、中间细胞群(91～160fl,包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞及幼稚细胞等)和大细胞群(161～450fl,以中性粒细胞为主)。
其特点是检测速度快,操作简便,可大大提高工作效率。此类仪器可用于常规检查标本白细胞分类的筛选,对仪器检测出的阳性标本应该进一步做显微镜检查。如有怀疑血液病的病人,即便仪器没提示异常,也应作血涂片,显微镜检查。
如何选购细胞计数仪
1、要考虑细胞计数仪的性价比:如果您的目的只是代替手工计数,节省操作者的时间,操作简便,完全没有必要花几十万买一台仅能进行细胞计数的仪器,花大钱办小事。
2、要考虑细胞计数仪的稳定性和重复性:如果您对细胞计数的准确性和重复性要求高,那仪器的高性能和稳定性是首要考虑因素,仪器的硬件以及配套软件的稳定都要考虑,不能一味的追求低价格。
3、要考虑根据细胞类型选择适合的型号:如果您的样本是原代细胞,背景复杂,红细胞和血小板污染严重,你又希望快速精确计数有核细胞且进行精确细胞活力分析,计数结果的准确性直接影响后续实验的成功和重现性。
4、要考虑实验室多功能检测需求:如果细胞计数和活力分析只是实验室的部分需求,而实验室还要进行凋亡、细胞周期、GFP等功能检测,且实验室也无配套的仪器,那为实验室装备一款多功能的细胞计数仪是您的最佳之选。
使用细胞计数仪的注意事项
1、务必使分散成单个细胞,取样计数前,充分混匀细胞悬液。
2、显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分。
3、如果计数时细胞密度较大,数起来较麻烦也不容易计准,所以如果感觉细胞数量较多时,可以从细胞悬液中吸取10至100u1,用少量PBS稀释后再作计数。
4、注意盖玻片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。
5、盖玻片要尽量擦干净,特别是不能带有纤维,否则会造成体积不准。另外四个大格中平均每个大格的细胞数宜在50-150左右,这样总数会比较准确。
